免疫组化、免疫荧光、流式细胞术的应用比较 及常见问题分析 免疫组化（IHC）的应用介绍 免疫荧光（IF）的应用介绍 流式细胞术（FC）的应用介绍 IHC、IF、FC区别与联系 免疫组织化学原理及特点 利用抗原与抗体的特异性结合原理和特殊的标记 技术，通过化学反应使标记抗体显色，对组织细 胞内的特异性抗原进行定位、定性、定量检测的 一门技术。 免疫组化具有操作简单，特异性强，敏感性高， 定位准确，形态与功能相结合等特点。 免疫组织化学 （Immunohistochemistry, IHC） 辣根过氧化物酶（HRP）3，3-二氨联苯胺（DAB） 显色剂 棕褐色络合物 组织芯片应用领域组织芯片的应用领域包括与生命科学相关的 基础研究、临床研究、应用研究和新药开发 免疫组化染色（IHC）；原位杂交（ISH）； 荧光原位杂交（FISH）； 原位末端标记分析（TUNEL）； 原位PCR 以及激光捕获显微分离系统辅 助的cDNA杂交。 组织芯片组织芯片（或组织微阵列）是将数十个甚 至上千个不同个体的组织标本集成在一张固 相载体上，组织芯片中含有蛋白，RNA及DAN 分子，是一种高通量的研究分析工具。

研究 者一次可有效利用成百上千份正常或疾病状 态下的组织标本来研究特定基因及其所表达 的蛋白质与疾病之间的关系。 Abgent现有组织切片/芯片产品 全套鼠类器官组织切片； 全套猴类器官组织切片； 人类常见癌症组织切片； 组织芯片客户定制服务。 组织芯片/切片应用 免疫组化流程示意图 SP法原理：根据生物素(Biotin) 与链霉亲和素 (Streptavidin)具有强结合力的原理设计。在 一抗（兔源与鼠源）与相应的靶抗原结合后， 生物素化标记的抗多价二抗与一抗特异结合； 二抗上标记的生物素与标记了辣根过氧化物 酶（HRP）的链霉亲和素结合，形成抗原～ 特异性一抗～生物素化的二抗～HRP 标记 的链霉亲和素复合物。 特点：该法孵育时间短（通常为10min）， 灵敏度高以及低背景染色等特点。 SABC法原理：SABC法是利用链酶亲和素 (Streptavidin)与生物素(Biotin)特有的高度亲 和力这一生物学性质，先将生物素与辣根过 氧化物酶(HRP)结合，形成生物素化HRP， 然后与链酶亲和素按一定比例混合，形成 SABC复合物。用生物素化二抗与第一抗体 结合，再与SABC复合物联结形成抗原～抗 体～生物素化二抗～ SABC复合物。

最后用 底物显色剂显色。 特点：该法具有灵敏度高以及低背景染色 等特点。 Polymer酶标二抗法原理：该法采用一段多聚氨基酸聚合物做 为载体链，将该多聚物与二抗结合，然后可 再标记上多个HRP/AP酶分子，所以同样具 有很高的信号放大作用。 特点：灵敏度高；操作步骤简单；无需进 行内源性的生物素封闭。 IHC二抗原理及选择 直接酶标二抗法该法是将HRP/AP酶分子直接标记于二抗 上。因此需要普通的酶标二抗即可完成。实 验简单，成本低，但是因为没有信号放大作 用，所以对很多表达丰度不是很高的抗原就 可能检测不到。 IHC常用酶标二抗原理示意图 AEC显色法产品描述：3-氨基-9-乙基咔唑(3-amino-9- ethylcarbazole，AEC) 是过氧化物酶 (Peroxidase) 的显色底物，在过氧化物酶的 催化下，AEC显色工作液会于反应部位产生 溶于酒精的红色沉淀，必须在水溶性介质中 复染和封片。本试剂盒适用于辣根过氧化物 酶（HRP）系统的免疫组化显色，包括AEC 显色原和与之配套的稀释液。 试剂盒组成： AEC显色原（试剂A） AEC底物缓冲液（试剂B） DAB显色法产品描述：二氨基联苯胺( 3，3’- diaminobenzidine，DAB 是过氧化物酶(Peroxidase) 的显色底物，在过氧化物酶的 催化下，DAB显色工作液会于反应部位产生 不溶于酒精的棕褐色沉淀。